Zur Hydrolyse und Extraktion der Harnoestrogene

Zusammenfassung

Die Ergebnisse von Oestrogenausscheidungsbestimmungen sind weitgehend von der Art der Aufarbeitung des Urins abhängig. Da bis heute noch keine einheitlichen Auffassungen über optimale Hydrolyse- und Extraktionsbedingungen bestehen, wurden unter Berücksichtigung des bisher Erarbeiteten und unter Anwendung moderner Oestrogenbestimmungsmethoden und Trennungsverfahren die einzelnen Schritte in der Vorbehandlung des Urins untersucht.

Die Oestrogene werden als Schwefelsäure- und Glucuronsäureester in den Urin ausgeschieden und sind in dieser Form nicht ätherlöslich. Zur Spaltung dieser Oestrogen-Säurebindungen wird heute fast allgemein dieSäurehydrolyse unter den vonSmith undSmith (1935) angegebenen Bedingungen benutzt. Unter Verwendung verschiedener Versuehsanordnungen und Methoden konnte gezeigt werden, daß bei dem Kochen nach Zusatz von 15 Vol.- % konzentrierter Salzsäure

• 1. die optimale Hydrolysedauer der Oestrogenbindungen bei 2 Std liegt

• 2. die Oestron-Oestradiolsäurebindung schneller gespalten wird als der Oestriolester und

• 3. die Gefahr des Abbaus freier Oestrogene auch bei vielstündigem Kochen gering ist.

Die Ergebnisse derEnzymhydrolyse mitβ- Glucuronidase und Steroid-Sulfatase waren uneinheitlich und erreichten nicht die Werte der vergleichenden Säurehydrolyse.

An Hand der Verteilungskoeffizienten der drei Oestrogene zwischen organischen Lösungsmitteln und einer wäßrigen, sauren Phase ließ sich nachweisen, daß Äther dem Benzol und Toluol alsExtraktionsmittel überlegen ist. Zur Aufstellung eines geeignetenReinigungsverfahrens der Ätherextrakte wurden ebenfalls die Verteilungskoeffizienten der Oestrogene zwischen Äther und Waschlösungen herangezogen. Es wurde ein Reinigungsverfahren beschrieben, das unter weitgehender Vermeidung von Oestrogenverlusten zu einer optimalen Abscheidung der Verunreinigungen führt.