Zusammenfassung
Die Technik des Nachweises der a. L.-Ph. in Blutausstrichen wird besprochen. Zur Fixierung wird die Methode vonKaplow empfohlen: 90% Methanol, 10% Formol 1:10, 30 sec bei 0°C. Vergleichswerte mit anderen Fixantien werden aufgeführt.
Metallionen aktivieren die a. L.-Ph. in derart fixierten Ausstrichen in der Reihenfolge abnehmender Wirksamkeit:
Mg++-Fe+++-Co++-Mn++-Cu++-Fe++. Die Wirkung aller Ionen erwies sich als stark konzentrationsabhängig. Ni++, Zn++ und Pb++ hemmten ebenfalls konzentrationsabhängig.
In den Blutausstrichen ist die Spaltungsgeschwindigkeit des sauren Na-α-Naphthylphosphats (Azo-Kupplung) weit höher als die des β-Glycerophosphats bei maximaler Mg++-Aktivierung mit der Calcium-Kobalt-Methode nachGomori-Takamatsu. Die Spaltungsgeschwindigkeit von β-Glycerophosphat kann durch Zusetzen kleiner Mengen Fe+++ und Cu++ über die Mg++-Aktivierung hinaus gesteigert werden bei Beschleunigung der Anfangsgeschwindigkeit der Hydrolyse.
Summary
A technic is described for demonstrating the activity of alkaline phosphatase in human leucocytes. For fixation the method ofKaplow is recommended: 90 per cent methanol +10 per cent formalin 1:10 for 30 seconds at 0°C. Other fixatives are evaluated.
Under the conditions of the experiment metal ions activated the alkaline phosphatase of leucocytes in the following order: Mg++>Fe+++>Co++>Mn++>Cu++>Fe++.
The effectiveness of all these metal ions was to a high degree dependent on concentration. Ni++, Zn++, and Pb++ showed an inhibitory effect also dependent on concentration.
In fixed blood smears the velocity of hydrolysis of sodium-α-naphthylphosphate (simultaneous azo-coupling technic) is far greater than that of Na-β-glycerophosphate (Ca-Co-method of Gomori-Takamatsu). Adding small amounts of Fe+++ and Cu++ to the incubation medium, it is possible to increase the velocity of hydrolysis of glycerophosphate beyond the values of maximal Mg++ activation and simultaneously enhancing the initial velocity of the reaction.
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Plenert, W. Methodische Studien zur Zytochemie der Leukozytenphosphatasen. Histochemie 1, 171–177 (1959). https://doi.org/10.1007/BF00736478
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