Summary
Tumor tissue of cutaneous fibrosarcoma was solubilized with salt, acetic acid and salt-extracted after pepsin treatment.
Type III collagen was observed in neutral soluble collagen, 1.5 M and 2.4 M NaCl precipitated fractions after pepsin treatment. Type III collagen fraction precipitated with 1.5 M NaCl eluted in theα 2 region when chromatographed on CM-cellulose without reduction, while the type III collagen partially purified with 1.5 M NaCl eluted between the position ofα 1(I) andβ 12 after reduction and alkylation.
Analysis of amino acid showed the presence of cysteine and the high content of hydroxyproline following CM-chromatography of 1.5 M NaCl precipitated type III collagen fraction.
Acidic glycosaminoglycans were composed of hyaluronic acid, chondroitin sulfate, dermatan sulfate and heparan sulfate, and the first two were major components of fibrosarcoma.
Zusammenfassung
Das Tumorgewebe eines cutanen Fibrosarkoms wurde in NaCl sowie Essigsäure gelöst und unlösliches Kollagen durch entsprechende Pepsinbehandlung in Essigsäure für die Gel-Elektrophorese vorbereitet.
Typ III Kollagen wurde in neutralem löslichen Kollagen, welches in 1.5M und 2.4 M NaCl nach vorhergehender Pepsinbehandlung präzipitierte. Die Typ III-Kollagen-Fraktion, die mit 1.5 M NaCl eluiert wurde, präzipitierte in derα 2-Region bei der Chromatographie mit CM-Cellulose, ohne daß eine Reduktion durchgeführt wurde, während der Typ III Kollagen, welcher partiell gereinigt war und mit 1.5M Kochsalz eluiert wurde zwischenα 1(I) undβ 12 nach Reduktion und Alkylierung präzipitierte. Die Analyse der Aminosäuren zeigte die Anwesenheit von Cystein und einen höheren Gehalt an Hydroxyprolin in der Typ III-Kollagen-Fraktion, die nach der CM-Chromatographie und Präzipitierung mit 1.5 M Kochsalz erhalten wurde. Saure Glykosaminglykane setzen sich aus Hyaluronsäure, Chondroitinsulfat, Dermatansulfat und Heparansulfat zusammen; Hyaluronsäure und Chondroitinsulfat waren die hauptsächlichsten Komponenten des Fibrosarkoms.
Similar content being viewed by others
References
Bailey, A. J., Bazin, S., Sims, J. J., LeLous, M., Nicoletis, C., Delaunay, A.: Characterization of the collagen of human hypertrophic and normal scars. Biochim. Biophys. Acta405, 412–421 (1975)
Barnes, M. J., Morton, L. F., Bennet, R. C., Bailey, A. J., Sims, J. J.: Presence of type III collagen in guinea pig dermal scar. Biochem. J.157, 263–266 (1976)
Byers, P. H., McKenny, K. H., Lichtenstein, J. R., Martin, G. R.: Preparation of type III procollagen and collagen from rat skin. Biochemistry13, 5243–5248 (1974)
Chung, E., Keele, E. M., Miller, E. J.: Isolation and characterization of the cyanogen bromide peptides from the α1(III) chain of human collagen. Biochemistry13, 3459–3464 (1974)
Chung, E., Miller, E. J.: Collagen polymorphism: Characterization of molecules with the chain composition [α1(III)]3 in human tissues. Science183, 1200–1201 (1974)
Epstein, E. H.: [α1(III)]3 human skin collagen. J. Biol. Chem.249, 3225–3231 (1974)
Eyre, D. R., Muir, H.: The type III collagen: a major constituent of rheumatoid and normal human synovial membrane. Conn. Tiss. Res.4, 11–16 (1975)
Fujii, T., Kühn, K.: Isolation and characterization of pepsin-treated type III collagen from calf skin. Hoppe-Seyler's Z. Physiol. Chem.356, 1793–1801 (1975)
Gay, S., Müller, P. K., Meigel, W. N., Kühn, K.: Polymorphie des Kollagens. Neue Aspekte für Struktur und Funktion des Bindegewebes. Hautarzt27, 196–205 (1976)
Hata, R., Nagai, Y.: A rapid and micro method for separation of acidic glycosaminoglycans by two-dimensional electrophoresis. Anal. Biochem.45, 462–468 (1972)
Hayashi, T., Nagai, Y.: Separation of α1(I) and α1(III) chain of collagen used by SDS-polyacrylamide gel electrophoresis. Seikagaku48, 514 (1976)
Herman, H., von der Mark, K.: Isolation and characterization of type III collagen from chick skin. Hoppe-Seyler's Z. Physiol. Chem.356, 1605–1612 (1975)
Kawamoto, T., Nagai, Y.: Developmental changes in glycosaminoglycans, collagen and collagenase activity in embroyonic chick skin. Biochim. Biophys. Acta437, 190–199 (1976)
King, J., Laemmli, U.: Polypeptides of the tail fibers of bacteriophage T4. J. med. Biol.62, 465–477 (1971)
Lapiere, C. M., Pierard, G.: Skin procollagen peptidase in normal and pathologic conditions. J. invest. Derm.62, 582–586 (1974)
Nowack, H., Gay, S., Wick, G., Becker, U., Timpl, R.: Preparation and use in immunohistology of antibodies specific for type I and III collagen and procollagen. J. Immunol. Methods12, 117–124 (1976)
Piez, K. A., Eigner, E. A., Lewis, M. S.: The chromatographic separation and amino acid composition of the subunits of several collagens. Biochemistry2, 58–66 (1963)
Rojkind, M., Martinez-Palmo, A.: Increase in type I and III collagen in human alcoholic liver cirrhosis. Proc. Natl. Acad. Sci.73, 539–543 (1976)
Shinkai, H., Fujiwara, N., Matsubayashi, S., Sano, S.: Effect of thiocyanate on human skin collagenase activity. J. Derm.1, 145–151 (1974)
Shuttleworth, C. A., Forrest, L.: Changes in guinea-pig dermal collagen during development. Europ. J. Biochem.55, 391–395 (1975)
Timpl, R., Glanville, R. W., Nowack, H., Wiedemann, H., Fietzek, P. P., Kühn, K.: Isolation, chemical and electron microscopical characterization of neutral-salt-soluble type III collagen and procollagen from fetal bovine skin. Hoppe-Seyler's Z. Physiol. Chem.356, 1783–1792 (1975)
Trelstad, R. L.: Human aorta collagens: Evidence for three distinct species. Biochem. Biophys. Res. Commun.57, 717–725 (1974)
Author information
Authors and Affiliations
Rights and permissions
About this article
Cite this article
Matsubayashi, S., Shinkai, H. & Sano, S. Biochemical Characterization of Connective Tissue Macromolecules Derived from Cutaneous Fibrosarcoma. Arch. Derm. Res. 260, 93–102 (1977). https://doi.org/10.1007/BF00561114
Received:
Issue Date:
DOI: https://doi.org/10.1007/BF00561114