Der Agglutinationstest zur Antigenbestimmung von Zellstämmen

Zusammenfassung

Der Agglutinationseffekt von Antiseren auf isolierte Zellen eines gezüchteten Zellstammes kann nach Ausschaltung einer spontanen Zusammenziehung der Zellen zu einer empfindlichen Reaktion ausgebaut werden. Zur Erzeugung der Agglutinine werden dem Kaninchen ganze Zellen injiziert. 2–3 Injektionen von je 1/2 Mill. Zellen führen innerhalb von 7 Tagen zu Antiseren, die noch in einer Verdünnung von 1:512 bis 1:16384 die Zellen der eingespritzten Art agglutinieren. Homogenisierte Zellen erzeugen geringere Agglutinationstiter. — Der Agglutiningehalt der Antiseren bleibt auch nach Inaktivierung voll bestehen. Frische Seren führen in den Anfangsverdünnungen oft nicht zur Agglutination. Ihr Komplementgehalt macht die Antikörper cytotoxisch, der austretende Zell-Inhalt hemmt offenbar die Agglutination. Nach Inaktivierung ist die Agglutination mit diesen Seren jedoch auch in den ersten Verdünnungen voll ausgeprägt. — In Serumverdünnungen, von denen die Zellen noch agglutiniert werden, binden sie auch noch Komplement. — Hinsichtlich der groben Antigendifferenzen zwischen L-Stamm einerseits und HeLa- und Amnionstamm andererseits, sowie des gemeinsamen Antigens in diesen beiden menschlichen Stämmen stimmt der Agglutinationstest mit den bisher benutzten serologischen Verfahren überein. Die leicht erzeugbaren hohen Titer lassen die Agglutinationsreaktion für Absorptionsversuche auf der Suche nach kleinen Antigenunterschieden als geeignet erscheinen.

Summary

The agglutinating effect of antisera on isolated cells of a cultured cell strain may be developed into a sensitive reaction. For the production of the agglutinins whole cells are injected into rabbits; homogenized cells are less antigenic. Two to three injections of about 1/2 million cells lead within seven days to antisera which in dilutions of 1:512 to 1:16,384 agglutinate cells of the type injected. The titer of agglutination is similar in fresh or inactivated sera. In the first titer dilutions fresh sera often prevent agglutination. This inhibiting effect may be related to a substance being extruded from the cells or to damage of the surfaces of the cells. After inactivation of the sera this inhibition is gone. With complement fixation the antibodies of the sera react with the cells to the same degree as in the agglutination studies. The complement may be centrifuged off with the cells; its absence then may be detected by a hemolytic system. The agglutination test may be read in a serological tube. Less wasteful and more exact, however, is the observation of the results in a hanging-drop under the low power of the microscope. The results of the agglutination in three known monolayer-cell strains agree with the results of the serological technics hitherto used. Agglutination reaction with its easely produceable high agglutinin-titers seems to be suitable for researching small differences of antigens by absorption experiments.