Direkte spektralphotometrische Auswertung von Dünnschicht-Chromatogrammen im UV-Bereich

Summary

Thin-layer chromatography is a widely known method for the qualitative separation of microgram-quantities of organic compounds. For detection and identification without chemical reaction and for quantitative determination of single spots (0,5–10 μg) directly on the chromatogram, absorption spectra values were measured.

The method is based on the measurement of directional reflectance and it has been possible to obtain not only the absorption and emission spectra (fluorescence and phosphorescence) of the visible part of light but also the UV spectra. Influencing factors as connected with instrumental and measurement questions, have been studied in order to obtain the optimum solution.

For direct quantitative determination without extraction of the substances the law of Kubelka and Munk, with linear dependence of the amount of substance on the so-called k/s values, can be applied. The accuracy of the determination is ± 3–4%. In conclusion this method was compared to those methods which have been in practice till now. The results were summarized in a table.

Zusammenfassung

Mit Hilfe des beschriebenen Chromatogramm-Spektralphotometers ist die Aufnahme von Absorptions- und Fluorescenzspektren in Remission direkt auf dem Dünnschicht-Chromatogramm möglich. Es gelingt auf diese Weise erstmalig, entsprechend kleine Substanzmengen nach der Chromatographie absorptionsspektralphotometrisch zu identifizieren. Die bisherigen Methoden, die nach Elution der Verbindungen eingesetzt wurden, sind 10–30mal unempfindlicher und lassen sich bei derartig kleinen Mengen nicht verwenden. Sie sind darüber hinaus zeitraubender und bieten mehr Fehlermöglichkeiten als die Direktmessung. Das gilt ebenso für die quantitative Auswertung von Dünnschicht-Chromatogrammen, und zwar besonders im ultravioletten Spektralbereich. Über die Kubelka-Munk-Funktion, deren Gültigkeit bei anders gelagerten Untersuchungen für das sichtbare Gebiet wiederholt experimentell bestätigt wurde, lassen sich Eich geraden aufstellen, die eine mengenmäßige Erfassung der Substanzen mit einer Richtigkeit von 3–4% gewährleisten. Ein Vergleich dieser Bestimmungsmethode mit vier weiteren, bisher praktizierten Verfahren fiel eindeutig zugunsten der direkten Remissionsmessung aus. Auf verschiedene Einflußfaktoren bei der Messung wurde eingegangen.