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Diabetologia

, Volume 2, Issue 2, pp 91–95 | Cite as

The properties of trichloracetic acid-ethanol extracts of human plasma

2. Physical, chemical and immunological properties of the extracts
  • J. S. Cameron
  • D. R. Boyns
  • R. J. Jarrett
  • H. Keen
Originals

Summary

The insulin-like activity (ILA) of T.C.A.-ethanol extracts, prepared from the plasma of normal subjects was compared with that of crystalline insulin. Dose-response curves were obtained for the glucose uptake and 14C-glucose incorporation into lipid of the epididymal fat pad and the glucose uptake of the rat hemidiaphragm. For each of these, the dose-response relationship of the ILA of the extract approximated to that of crystalline insulin. The stimulation of 14C-glucose incorporation into lipid by the extracts and by crystalline insulin was suppressed by 10−4M n-ethylmaleimide. Antiserum to ox-insulin from guinea pigs, which completely suppressed the effect of human and bovine crystalline insulin, had no effect upon the ILA of eight extracts and induced a small, but statistically significant reduction in the ILA of four extracts. — Studies were also performed, using gel filtration by sephadex G. 200, on extracts prepared from the plasma of both normal and diabetic individuals, and upon three pooled T.C.A.-ethanol extracts. In each case, the extract showed two peaks of elution of protein, the second being identical with that of 125I-labelled human albumin. The first peak corresponded to an apparent molecular weight of 300000–1000000. Despite the difference in molecular weight, the properties of the two eluates were similar when compared by electrophoresis and by immuno-electrophoresis. Assay of the column eluate showed that both non-suppressible ILA and immunoreactive insulin were present throughout the whole range of elution. — The findings are discussed with reference to the phenomenon of insulin-like activity and of synalbumin antagonism.

Keywords

Crystalline Insulin Tissu Adipeux Bovine Crystalline Insulin Plasma Humain 
These keywords were added by machine and not by the authors. This process is experimental and the keywords may be updated as the learning algorithm improves.

Les propriétés d' extraits de plasma humain par l'acide trichloracétique-éthanol

2. Propriétés physiques, chimiques et immunologiques des extraits

Résumé

L'activité insulinique (insulin-like activity: ILA) d'extraits par l'acide trichloracétique (T.C.A.)-éthanol, préparés à partir de plasma de sujets normaux, a été comparée à celle de l'insuline cristalline. Les courbes dose-effet ont été obtenues pour la captation du glucose et l'incorporation de 14C-glucose dans les lipides du tissu adipeux de l'épididyme, et pour la captation du glucose par l'hémidiaphragme du rat. Pour chacun de ces tests la relation dose-effet de l'ILA de l'extrait était voisine de celle de l'insuline cristalline. La stimulation de l'incorporation du 14C-glucose dans les lipides par les extraits et par l'insuline cristalline était supprimée par la n-éthylmaléimide 10−4M. Le sérum de cobaye anti-insuline bovine, qui supprimait complètement l'effet de l'insuline cristalline humaine et bovine, n'a pas eu d'effet sur l'ILA de huit extraits et a produit pour quatre extraits une réduction de l'ILA légère mais statistiquement significative. — Des études ont été aussi réalisées en utilisant la filtration sur gel de Sephadex G 200, sur des extraits préparés à partir de plasma à la fois de sujets normaux et diabétiques et sur trois« pools» d'extraits par le T.C.A.-éthanol. Dans chaque cas, l'extrait a montré deux pics d'élution de protéine, le second étant identique à celui de l'albumine humaine marquée a l'125I. Le premier pic correspondait à un poids moléculaire apparent de 300 000–1000000. En dépit de la différence de poids moléculaire, les propriétés des deux éluats étaient semblables quand on les a comparées par électrophorèse et par immunoélectrophorèse. Un dosage de l'éluat de la colonne a montré que, à la fois, l'ILA non-supprimable et l'insuline immuno-réactive étaient présentes dans toutes les fractions de l'élution. Les résultats sont discutés en se référant au phénomène de l'activité insulinique et de l'antagonisme par synalbumine.

Die Eigenschaften von Trichloressigsäure-Äthylalkohol-Extrakten des menschlichen Plasmas

2. Physikalische, chemische und immunologische Eigenschaften der Extrakte

Zusammenfassung

Die insulinähnliche Aktivität (ILA) von aus dem Plasma von Normalpersonen gewonnenen Trichloressigsäure-Äthylalkohol-Extrakten und von kristallinem Insulin wurde miteinander verglichen. Es ließen sich Dosis-Wirkungskurven für die Glucoseaufnahme und die Einlagerung von 14C-Glucose in das Fett des epididymalen Fettgewebes und für die Glucoseaufnahme des Hemidiaphragmas der Ratte aufstellen. Für jede dieser Reaktionen war die Beziehung Dosis —Wirkung der ILA der Extrakte annähernd gleich der des kristallinen Insulins. Die Steigerung der 14C-Glucose-Einlagerung in Fett durch die Extrakte und durch kristallines Insulin wurde durch 10−4 M n-Äthylmaleimid unterdrückt. Antirinderinsulinserum vom Meerschweinchen, das die Wirkung von menschlichem und kristallinem Rinderinsulin vollständig hemmte, hatte auf die ILA von acht Extrakten keinen Effekt und führte bei 4 Extrakten zu einem kleinen doch statistisch gesicherten Abfall der ILA. Unter Benutzung der Gelfiltration durch Sephadex 200 wurden weitere Versuche mit Extrakten aus dem Plasma normaler und diabetischer Menschen und mit drei „gepoolten” Trichloressigsäure-Alkohol-Extrakten durchgeführt. In allen Fällen zeigte der Extrakt zwei Eiweißelutionsgipfel, wobei der zweite mit dem Gipfel des 125J markierten menschlichen Albumins identisch war. Der erste Gipfel entsprach einem augenscheinlichen Molekulargewicht von 300000 − 1000000. Trotz des Unterschiedes im Molekulargewicht waren die Eigenschaften der beiden Eluate beim Vergleich in der Elektrophorese und Immunelektrophorese ähnlich. Die Insulinbestimmung des Säulen-Eluats zeigte, daß die nichthemmbare ILA und das immunologisch aktive Insulin über den gesamten Elutionsbereich vorhanden waren. — Die Ergebnisse werden in bezug auf das Phänomen der insulinähnlichen Aktivität und des Synalbuminantagonisten besprochen.

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Copyright information

© Springer-Verlag 1966

Authors and Affiliations

  • J. S. Cameron
    • 1
  • D. R. Boyns
    • 1
  • R. J. Jarrett
    • 1
  • H. Keen
    • 1
  1. 1.Department of MedicineGuy's HospitalLondon

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