Methode zur Quantitativen Trennung und Bestimmung Flüchtiger Pflanzlicher Amine

Summary

• 1. A routine method for the separation and determination of volatile primary and secondary amines found in biological material is described.

• 2. Amine concentrations up to 10 μM were converted quantitatively (error <2%) to the corresponding 2,4-dinitrophenyl derivatives (DNP-amines) by means of 2,4-dinitrofluorobenzene (DNFB). The DNP-amines were extrated with ether and determined spectrophotometrically at 350 mμ for DNP-derivatives of primary amines and at 264 mμ for DNP-derivatives of secondary amines. Procedures for the preparation of DNP-amine test substances, their absorption spectra and their extinction coefficients are given.

• 3. The quantitative separation of DNP-amines was carried out on paper chromatograms pretreated with 5% paraffin, using a methanol-water solvent saturated with chloroform.

• 4. The quantitative recovery of volatile amines from biological material was accomplished by an extraction with hot 0.01N HCl and alkaline steam distillation.

• 5. Experiments with test mixtures and biological extracts showed that the entire method is quantitative and reproducible with an error less than 5% for the following plant amines: methylamine, ethylamine, n- and iso-propylamine, isobutylamine, n-hexylamine and dimethylamine.

Zusammenfassung

• 1. Es wurde eine Methode ausgearbeitet, mit der sich kleine Mengen flüchtiger primärer und sekundärer Amine in Form ihrer 2,4-Dinitrophenylderivate (DNP-Amine) papierchromatographisch quantitativ bestimmen lassen.

• 2. Die Präparation von DNP-Amintestsubstanzen wird beschrieben, Absorptionsspektren, Eichkurven und Extinktionskoeffizienten der DNP-Amine werden angegeben. Die spektralphotometrischen Messungen wurden bei den für die einzelnen DNP-Amine ermittelten Wellenlängen maximaler Absorption durchgeführt: DNP-Derivate primärer Amine= 350 nm, DNP-Dimethylamin=369 nm, 2,4-Dinitranilin=236 nm.

• 3. Zur Umsetzung von Aminkonzentrationen bis zu 10 μMol mit 2,4-Dinitrofluorbenzol (DNFB) und zur Ätherextraktion der gebildeten DNP-Amine wurde ein einfaches für Reihenuntersuchungen geeignetes quantitatives Verfahren entwickelt. Das Verfahren ist mit einem Fehler von <±2% gut reproduzierbar.

• 4. Zur quantitativen Papierchromatographie der DNP-Amine erwies sich als unbewegliche Phase mit 5% Paraffin/Petroläther imprägniertes Papier, als Fließmittel Chloroform/Methanol/Wasser (4/10/6) als am besten geeignet. Zur Elution der DNP-Amine aus dem Papierchromatogramm wurde Methanol verwendet.

• 5. Zur quantitativen Gewinnung flüchtiger Amine aus biologischem Material erwies sich nach Vorextraktion mit kochender 0,01 n HCl die alkalische Wasserdampfdestillation für Methyl-, Dimethyl-, n+i-Propyl-, i-Butyl, i-Amyl-und n-Hexylamin als geeignet. Lediglich β-Phenyläthylamin ließ sich durch Destillation nicht verlustfrei gewinnen.

• 6. Reproduzierbarkeit und Fehlerbelastung der vollständigen Bestimmungsmethode (Wasserdampfdestillation, Umsetzung mit DNFB, Papierchromatographie, Elution und spektralphotometrische Bestimmung der DNP-Amine) wurden geprüft. Amintestsubstanzgemische ließen sich ebenso wie Aminextrakte aus biologischem Material (saprophytischen Kulturen von Claviceps purpurea) mit einem Fehler >±5% quantitativ bestimmen.