A simplified radioimmunological method for the determination of human β-endorphin in cerebrospinal fluid

Summary

Human β-endorphin-like immunoreactive substances (β _h -EI) in human cerebrospinal fluid (CSF) were determined radioimmunologically. The cross reactivity of the antibodies to human β-endorphin (β _h -E) amounted to 40% for human β-lipotropin (β _h -LPH) whilst it was less than 1% for leu-and metenkephalin, α- and γ-endorphin, fraction I and II [5], substance P and α-MSH. Prior to radioimmunological determination, an adsorbtion of β _h -EI from CSF with silicic acid was carried out and followed by a desorbtion, using a mixture of aceton/hydrochloric acid. This method was chosen because the ratio of β _h -LPH to β _h -E in the desorbat can be shifted in favour of β _h -E owing to the variation in recoveries r ($r_{\beta _h - LPH}$=33%, $r_{\beta _h - E}$=64%). On the one hand, this enables a more specific determination of β _h -E and, on the other hand, and separation of any peptidase than may be present [9]. An adsorbtion/desorbtion of 2 ml CSF suffices to prove the presence of 20–150 pg/ml (6–48 fmol/ml) of β _h -EI.

The CSF of 28 patients with various neurological diseases was examined and 24 of them had concentrations of 20–70 pg/ml β _h -EI. The remaining four, which had concentrations less than 20 pg/ml, came from meningitis patients undergoing corticoid therapy.

A purchasable RIA kit was tested for its determination of β _h -E and was found to be unsuitable.

Zusammenfassung

Beta-human-Endorphin-like immunreaktive Substanzen (β _h -EI) im menschlichen Liquor (CSF) wurden radioimmunologisch bestimmt. Die Kreuzreaktivität des von uns eingesetzten Antikörpers gegen Beta-human-Endorphin (β _h -E) zum Beta-human-Lipoprotein (β _h -LPH) betrug 40%, während sie zu Leu- und Met-Enkephalin, Alpha- und Gamma-Endorphin, Fraktion I und II nach Terenius [10], Substanz P und Alpha-MSH geringer war als 1%. Vor der radioimmunologischen Bestimmung wurde eine Adsorption von β _h -EI aus CSF an Kieselsäure mit anschließender Desorption mittels eines Gemisches aus Aceton/Salzsäure durchgeführt. Diese Methode wurde gewählt, weil sich dadurch das Verhältnis von β _h -LPH zu β _h -E im Desorbat zugunsten von β _h -E aufgrund der unterschiedlichen Recoveries R ($R_{\beta _h - LPH}$=33%, $R_{\beta _h - E}$=66%) verschob. Damit wird einerseits eine erhöhte Spezifität bei der Bestimmung von β _h -EI und andererseits eine Abtrennung von eventuell vorhandenen Peptidasen erreicht. Eine Adsorption/Desorption aus 2 ml CSF genügt, um β _h -EI von 20–150 pg/ml (6–48 fmol/ml) nachzuweisen.

Patienten (n=28) mit verschiedenen neurologischen Erkrankungen wiesen Werte von 20–70 pg/ml auf. Vier Liquores unter 20 pg/ml stammten von Meningitis-Patienten, welche unter einer Corticoidtherapie standen.

Ein käuflicher RIA-Kit wurde auf seine Eignung zur Bestimmung von β _h -E untersucht und verworfen.