Summary
Based on previous papers on the variable demonstration of DNA by means of a combination of acid hydrolysis and conjugation with acridine orange, a study was conducted to investigate if under standardized conditions alcohol fixed nuclei of tumours show differences in their DNA during mitosis and necrosis. A rather sudden change of the fluorescence to the long wave region after short hydrolysis (1 min, n/HCl, 37° or 60°) was observed: in all necrotic cell nuclei; in the nuclei of some of the tumours (45 out of 85); in the heterochromatine of an interphase nucleus, and in all cases of chromosomes in mitosis. Taking into consideration the current knowledge on the linking mechanism of acridine orange to nucleic acids of the cell nucleus, and on changes of the molecular structure of DNA following acid hydrolysis the morphologic substrate responsible for the change of the fluorescence could be: a lesser secondary structural stability of the DNA molecule; a lower degree of polymerisation and a higher level of a ribonuclease resistant DNA-RNA complex.
Although it is rather difficult to interprete the findings, it can be said that the method described reveals differences in the structure of certain cell nuclei, which so far have not been demonstrable.
Zusammenfassung
Aufbauend auf vorangegangenen Arbeiten über die unterschiedliche Darstellung von DNS durch Kombination einer Säurehydrolyse mit einer Akridinorange-fluorochromierung, sollte untersucht werden, ob sich, damit unter standardisierten Bedingungen Unterschiede der DNS an alkoholfixierten Kernen bei Tumoren, im Laufe der Mitose sowie bei Kernen nekrotischer Zellen darstellen lassen.
Ein rascherer Fluoreszenzumschlag zum Langwelligen bereits nach kurzer Hydrolyse (1 min, n/HCl, 37° oder 60°) war zu beobachten: bei allen nekrotischen Zellkernen, bei den Kernen eines Teiles der untersuchten Tumoren (in 45 von 85 Fällen), innerhalb eines Interphasekernes im Heterochromatin und in allen Fällen an den Mitosechromosomen. Unter Berücksichtigung unserer heutigen Vorstellungen über den Bindungsmechanismus des Akridinorange an die Nukleinsäuren des Zellkernes und über die Veränderungen der DNS-Molekülstruktur nach Säurehydrolyse kommen als morphologisches Substrat für den Fluoreszenzumschlag in Betracht: eine geringere sekundärstrukturelle Festigkeit des DNS-Moleküls, ein geringerer Polymerisationsgrad und ein erhöhter Gehalt an ribonukleaseresistentem DNS-RNS-Komplex.
Unabhängig von der noch problematischen Deutung der Befunde ist die angewandte Methode in der Lage, Unterschiede in der Struktur der Nukleinsäuren dieser Zellkerne zur Darstellung zu bringen, die sich bisher einem Nachweis entzogen haben.
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Literatur
Armstrong, J. A.: Histochemical differentiation of nucleic acid by means of induced fluorescence. Exp. Cell Res. 11, 640–643 (1956).
Beers, R. F., D. D. Hendley, and R. F. Steiner: Nature (Lond.) 182, 242 (1958). Zit. nach D. F. Bradley and N. K. Wolf.
Bertalanffy, L. v., and I. Bickis: Identification of cytoplasmic basophilia (ribonucleic acid) by fluorescence microscopy. J. Histochem. Cytochem. 4, 481–493 (1956).
Bleyl, U.: Fluoreszenzmikroskopische Untersuchungen an überlebenden menschlichen Plazenten mit Acridin-Orange. Z. Zellforsch. 56, 404–424 (1962).
Boyle, R. E., S. S. Nelson, Fr. R. Dollish, and M. J. Olsen: The interaction of deoxyt ribonucleic acid and acridine orange. Arch. Biochem. 96, 47–50 (1962).
Bradley, D. F., and N. K. Wolf: Aggregation of dyes bound by polyanions. Proc. na Acad. Sci. (Wash.) 45, 944–952 (1959).
Braunsteiner, H., F. Dienstl u. S. Sailer: Das Lymphozytenproblem. Med. Klin. 58, 652–655 (1963).
Breton, E. Le, and Y. Moulé: Biochemistry and physiology of the cancer cell. In: The cell, vol. V. New York: Academic Press 1961.
Caspersson, T. U.: Zytoplasmatische Nukleotide in Tumorzellen. Naturwissenschaften 29, 29 (1941).
Donáth, T., and I. Lengyel: Analysis of the staining properties of acridine orange in epithelial cells. Acta morph. Acad. Sci. hung. 10, 21 (1961).
Durand, M. C., et R. Thomas: L'action de la ribonucléase sur l'acide thymique. Biochim. biophys. Acta (Amst.) 12, 416–623 (1953).
Frenster, J. H.: Repressed and active chromatin isolated from interphase lymphocytes. Proc. nat. Acad. Sci. (Wash.) 50, 1026–1032 (1963).
Frenster, J. H., V. G. Allfrey, and A. E. Mirsky: Metabolism and morphology of ribonucleoprotein particles from the cell nucleus of lymphocytes. Proc. nat. Acad. Sci. (Wash.) 46, 432–444 (1960).
Gay, H.: Cytochemical localization of cellular nucleic acids and proteins and determination of their patterns of association. Ann. Histochim. (Paris) 6, 467–476 (1961).
Gössner, W.: Zur Histochemie des Strugger-Effektes. Verh. d. Dtsch. Ges. f. Path. 33. Tagg 1950, S. 102.
Hecht, A., u. G. Korb: Fluoreszenzmikroskopische Befunde an Spätstadien des experimentellen Herzinfarktes der Ratte. Acta biol. med. germ. 10, 154–163 (1963).
u. H. David: Vergleichende histochemische, fluoreszenzmikroskopische und elektronenoptische Untersuchungen zur Frühdiagnose des Herzinfarktes der Ratte. Virchows Arch. path. Anat. 334, 267–284 (1961).
Hurlen, E., S. G. Laland, R. A. Cox u. A. R. Peacocke: Acta chem. scand. 10, 793 (1956). Zit. nach Michelson.
Kasten, F. H.: The feulgen reaction. — A enigma in cytochemistry. Acta histochem. (Jena) 17, 88–99 (1964).
Korb, G., u. A. Hecht: Der Einfluß der Autolyse auf das fluoreszenzmikroskopische Erscheinungsbild des experimentellen Herzinfarktes bei der Ratte. Verh. d. Dtsch. Ges. f. Path. 45. Tagg 1961, S. 331–332.
Krug, H., u. P.-Fr. Mahnke: Cytophotometrische und karyometrische Untersuchungen an Lymph- und Plasmazellen bei Antikörperbildung. Frankfurt. Z. Path. 73, 279–295 (1964).
Lerman, L. S.: The structure of the DNA-acridine complex. Proc. nat. Acad. Sci. (Wash.) 49, 94–102 (1963).
Leuchtenberger, C.: A cytochemical study of pycnotic nuclear degeneration. Chromosoma (Berl.) 3, 449–473 (1950).
Love, R., and R. H. Liles: Differentiation of nucleoproteins by inactivation of protein-bound amino groups and staining with toluidin blue and ammonium molybdate. J. Histochem. Cytochem. 7, 164–181 (1959).
—, and G. Rabotti: Studies of the cytochemistry of nucleoproteins. III. Demonstration of deoxyribonucleic-ribonucleic acid complexes in mammalian cells. J. Histochem. Cytochem. 11, 603 (1963).
—, and R. J. Walsh: Studies of the cytochemistry of nucleoproteins. II. Improved staining methods with toluidine blue and ammonium molybdate. J. Histochem. Cytochem. 11, 188–196 (1963).
Mayor, H. D.: Studies with the fluorochrome acridine orange on the nucleic acids of some purified viruses. In: The molecular basis of neoplasia, p. 496–503. Austin: University of Texas Press 1962.
Mazia, D.: Mitosis and the physiology of cell division. In: The cell von J. Brachet u. A. E. Mirsky, vol. III. New York and London: Academic Press 1961.
Meissel, M. N.: Lumineszenzmikroskopische Analyse des funktionellen Zustandes der lebenden Substanz. [Russisch.] Izv. Akad. Nauk S.S.S.R., Ser. Fiziol. 15, 788–791 (1951).
Michelson, A. M.: The chemistry of nucleosides and nucleotides. London and New York: Academic Press 1963.
Morthland, P. W., P. P. H. DeBruyn, and N. H. Smith: Spectrophotometric studies on the interaction of nucleic acids with aminoacridines and other basic dyes. Exp. Cell Res. 7, 201–214 (1954).
Oberling, Ch., and W. Bernhard: The morphology of the cancer cells. In: The cell, von J. Brachet u. A. E. Mirsky, vol. V. New York and London: Academic Press 1961.
Perutz, M. F.: Proteins and nucleic acids. Structure and function. Amsterdam-London-New York: Elsevier Publ. Co. 1962.
Rigler Jr., R.: Mikrofluorometrische Untersuchungen an Akridinorange-NukleinsäureKomplexen in Kulturzellen und Mikrotropfenmodellen. 2. Internat. Kongr. f. Histo- und Cytochemie Frankf./M. 1964, S. 233. Berlin-Göttingen-Heidelberg: Springer 1964.
Roschlau, G.: Fluoreszenzmikroskopische Befunde bei der akuten Tetrachlorkohlenstoffvergiftung der Rattenleber. Virchows Arch. path. Anat. 336, 122–131 (1962).
—, u. J. Reinke: Vergleichende fluoreszenzmikroskopische und lichtmikroskopische Untersuchungen über die Säurehydrolyse der Kern-DNS. Acta histochem. (Jena) 18, 328–335 (1964).
Sadron, Ch.: L'édifice désoxyribonucléique. In: Deoxyribonucleic acid. Structure, synthesis and function. Proc. of the 11th Annual Reunion of the Soc. de Chimie Physique, June 1961. London, New York, Oxford, Paris: Pergamon Press 1962.
Sandritter, W., K. Jobst, L. Rakow u. K. Bosselmann: Zur Kinetik der Feulgenreaktion bei verlängerter Hydrolysezeit. Cytophotometrische Messungen im sichtbaren und ultravioletten Licht. Histochemie 4. 420–437 (1965).
— G. Kiefer u. W. Rick: Über die Stöchiometrie von Gallocyaninchromalaun mit Desoxyribonukleinsäure. Histochemie 3, 315–340 (1963).
Schmidt, F.: Induktionstheorie der Krebsentstehung. In: F. Schmidt, Krebs, Virus und Induktor. Berlin: Akademie-Verlag 1960.
Schümmelfeder, N.: Strukturveränderungen des Protoplasmas bei dem Absterben der Zelle. Verh. d. Dtsch. Ges. f. Path. 33. Tagg 1950, S. 65–69.
— E. Krogh u. K. J. Ebschner: Färbungsanalysen zur Acridinorange-Fluorochromierung. Histochemie 1, 1–28 (1958).
Sibatani, A.: Ribonucleic acids of cancer cells. Exp. Cell Res., Suppl. 9, 289–329 (1963).
Spiegelman, S.: The relation of informational RNA to DNA. Cold Spr. Harb. Symp. quant. Biol. 24, 75–90 (1961).
Steiner, R. F., and R. F. Beers: Arch. Biochem. 81, 75 (1959). Zit. nach Bradley and Wolf.
Stolk, A.: Two types of ribonucleoprotein in the nucleolus of tumor cells. Naturwissenschaften 46, 654 (1959).
Strugger, S.: Fluoreszenzmikroskopische Untersuchungen über die Aufnahme und Speicherung des Acridinorange durch lebende und tote Pflanzenzellen. Jena. Z. Med. Naturw. 73, 97–134 (1940).
—: Fluoreszenzmikroskopie und Mikrobiologie. Hannover: M. u. H. Schaper 1949.
Sugár, J., u. Eva Gáti: Polarisationsoptische und fluoreszenzmikroskopische Untersuchung der Nucleinsäuren an Degranol-resistenten Ascitestumoren. Z. Krebsforsch. 65, 551–554 (1962).
Szirmai, J. A., and Pia C. van der Linde: Studies on the dyebinding and metachromasia of thymus nuclei. Histochemie 3, 233–248 (1963).
Tamm, C., and E. Chargaff: Physical and chemical properties of the apurinic acid from the desoxyribonucleic acid of calf thymus. J. biol. Chem. 203, 689 (1953).
Thorell, B.: Nucleic acids in chromosomes and mitotic division. In: The nucleic acids. Chemistry and biology, vol. II, p. 181–198, edit, by E. Chargraff u. J. N. Davidsen. New York: Academic Press 1955.
Vekerdi, L., and J. Sugár: Changes in nucleic acids of NK/Ly ascites lymphoma cells during autolysis. Acta histochem. (Jena) 16, 393–401 (1963).
Vendrely, C., and R. Vendrely: Localisation de l'acide ribonucléique dans les différents tissues et organes de vertébrés. In: Handbuch der Histochemie, Bd. III/2. Stuttgart: Gustav Fischer 1959.
Weissmann, Ch., u. A. Gilgen: Die Fluorochromierung lebender Ehrlich-Ascites-Carcinomzellen mit Akridinorange und der Einfluß der Glykolyse auf das Verhalten der Zelle. Z. Zellforsch. 44, 292–326 (1956).
Woods, P. S.: A chromatographic study of hydrolysis in the Feulgen nucleal reaction. J. biophys. biochem. Cytol. 3, 71–88 (1957).
Zanker, V.: Über den Nachweis definierter, reversibler Assoziate („reversible Polymerisate“) des Acridinorange durch Absorptions- und Fluoreszenzmessungen in wäßriger Lösung. Hoppe-Seylers Z. physiol. Chem. 199, 225–258 (1952).
—: Quantitative Absorptions- und Emissionsmessungen am Acridinorangekation bei Normal- und Tieftemperatur im organischen Lösungsmittel und ihr Beitrag zur Deutung des metachromatischen Fluoreszenzproblems. Hoppe-Seylers Z. physiol. Chem. 200, 250–292 (1952).
Über die Akridinfarbstoffe. Habilitationsarbeit. Fak. Allgem. Wissensch. TH München 1954.
Zeiger, K., H. Harders u. W. Müller: Der Strugger-Effekt an der Nervenzelle. Protoplasma (Wien) 40, 76–84 (1950/51).
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Einige Ergebnisse dieser Arbeit wurden auf der 4. Arbeitstagung der Arbeitsgemeinschaft Morphologie in der DDR am 2./3. Oktober 1964 in Leipzig vorgetragen und sind Teil einer Habilitationsschrift, die dem Senat der Medizinischen Akademie „Carl Gustav Carus“, Dresden, vorgelegen hat.
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Roschlau, G. Ein Beitrag zum histochemischen Verhalten der Kern-DNS in Interphase und Mitose, dargestellt durch kombinierte Säurehydrolyse und Akridinorangefluorochromierung. Histochemie 5, 396–406 (1965). https://doi.org/10.1007/BF00306291
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