Fixation experiments on cell nuclei

Summary

The addition of lanthanum salts to formalin improves nuclear fixation due to the irreversible precipitation of nucleic acids. Especially well preserved nuclei are obtained in smears prepared and dried at — 25° C., pre-fixed with formaldehyde vapors, and postfixed in buffered 5% formalin containing 1% lanthanum acetate or chloride.

With this technique, the nuclei reveal a finer and more distinct chromatin pattern, are more intensively stained by hematoxylin and Feulgen reaction, and show no shrinkage. Feulgen-microspectrophotometry demonstrates a considerably higher content of DNA which is also more resistant to nuclease digestion or perchloric acid extraction as compared to nuclei which have been fixed in formalin alone.

Zusammenfassung

Die Zugabe von Lanthansalzen zu Formalin verbessert die Kernfixierung infolge einer irreversiblen Fällung der Nukleinsäuren. Morphologisch besonders gut erhaltene Kerne werden in Tupfpräparaten erzielt, die bei — 25° C hergestellt und getrocknet, zur Vorfixierung Formaldehyddämpfen ausgesetzt und mit gepuffertem 5%-Formol nachfixiert werden, das 1% Lanthanazetat oder -chlorid enthält.

Nach Anwendung dieser Technik zeigen die Zellkerne ein feineres und distinkteres Chromatinmuster, sie sind stärker mit Hämatoxylin oder der Feulgen-Reaktion färbbar und lassen keine Schrumpfung erkennen. Das Fixations-Äquivalentbild scheint dem phasenkontrastmikroskopischen Erscheinungsbild lebender Zellkerne besser zu entsprechen. Die Mikrospektrophotometrie von Feulgen-Präparaten zeigt einen beträchtlich höheren Gehalt der individuellen Zellkerne an Desoxyribonukleinsäure. Verglichen mit einfacher Formolfixierung, bewirkt der Lanthanzusatz außerdem eine Erhöhung der DNS-Resistenz gegen Nukleasedigestion und Perchlorsäureextraktion.