Size and distribution of SV 40 DNA sequences covalently linked with the DNA of permissive mammalian cells

Summary

CV-1 cells productively infected with SV40 contain viral DNA which is covalently linked with the host cell DNA. These linear duplex viral-host DNA molecules are replicated during the infectious cycle. They can be selectively isolated and purified by two successive cycles of DNA-DNA hybridization and elution steps using first CV-1 cell and then SV40-DNA immobilized on filters. In an attempt to clarify the nature of the host DNA sequences neighbouring the viral DNA it was found that reiterated host DNA must be within the range of 800 bases from the viral sequences. Reassociation kinetics and treatment of the reassociated viral-host DNA sequences with single strand-specific S₁ nuclease have shown that unique host DNA sequences are always present in close neighbourhood of the viral DNA. Most of the SV40 DNA sequences are probably integrated as fragments of subgenomic length.

Zusammenfassung

Produktiv mit SV40 infizierte CV-1 Zellen enthalten kovalent mit der Wirtszell-DNS verbundene Virus-DNS. Die linearen Doppelstrang Virus-Zell-DNS Moleküle werden während des Infektionszyklus repliziert. Sie können mittels zweier DNS-DNS-Hybridisierungs- und Elutionsschritte selektiv isoliert und gereinigt werden. Dabei wird zuerst auf dem Filter immobilisierte CV-1 Zell-DNS und im zweiten Hybridisierungsexperiment immobilisierte SV40 DNS eingesetzt. Bei der Suche nach der Natur des Integrationsortes zeigte sich, daß innerhalb eines Bereiches von 800 Basen reiterierte Zell-DNS-Sequenzen entweder unmittelbar an die virale DNS angrenzen, oder aber in enger Nachbarschaft befindlich sein müssen. Reassoziierungskinetiken und die Behandlung der reassoziierten Virus-Zell-DNA-Sequenzen mit Einzelstrang-spezifischer S₁ Nuclease haben gezeigt, daß auch „unique” Zell-DNS-Sequenzen in enger Nachbarschaft der Virus-DNS vorkommen. Die meisten der Virus-DNS-Sequenzen Schemen in Form von Fragmenten subgenomischer Größe integriert zu sein.