Bestimmung der Silberkorngröße in Autoradiogrammen bei Auflicht und Durchlicht

Summary

In order to get informations about basic conditions of the use of a quantitative television microscope (“QTM”, Metalls Research Cambridge) as a grain counter in histological autoradiography we gathered data of the single silver granules concerning their number, diameters and projected areas in the optical plane.

The results were obtained by utilising the alterations of the vidicon's electron beam passing a silver grain, the electrical characteristics being transformed into metric data by a computer. For that purpose a high degree of optical precision is necessary. We were successfull in adjusting both Leitz “Ortholux” and Zeiss “Standard Universal” microscopes to the electronic device. With this equipment we found according to Roger's visually gained experience (1967) the tritium caused granules to be bigger than the unspecific ones forming the background. The different mean diameters were 0.89 μm in the one case and 0.64 μm in the other. This event is seen to be remarkable because it opens a chance for suppressing the background, partly or whole, by electronical means as shown in particle size distribution analysis by Fisher (1966). There are another two results which may influence further methodological investigations, toc.

• 1. Measured with incident light illumination the silver granules are bigger than using transmitted-light. In our material the ratio was 0.64 μm to 0.60 μm. The difference is caused by an alteration of the depth of sharp definition if changing the illuminating system.

• 2. The low resolution power of the vidicon claims a high microscopical enlargement in case of using it for autoradiography investigations. Because it has a low sensibility, too, one has to take care of sufficiant illumination e.g. by using a xenon 250 W lamp.

Zusammenfassung

Um Grundlagen für die Verwendung eines quantitativen Fernsehmikroskops zur elektronischen Kornzählung in Autoradiogrammen zu erhalten, wurden Anzahl, Durchmesser und Flächenprojektion der einzelnen Silberkörner bestimmt. Zur Messung wurden die Veränderungen ausgenutzt, die der Elektronenstrahl der Fernsehkamera erfährt, wenn er über das Bild eines Silberkörnchens läuft. Die gewonnenen elektrischen Signale wurden von einem Rechner aufgenommen und in metrische Daten umgewandelt. Das Vorgehen verlangt eine hohe optische Präzision. Es gelang, die Mikroskope „Ortholux” (Leitz) und „Standard Universal” (Zeiss) an die elektronische Apparatur, das „QTM” (Quantitative Television Microscope der Firma Metals Research Cambridge) anzupassen. Messungen an einzelnen Silberkörnern ergaben:

• 1. Objektivierung einer visuellen Beobachtung von Rogers (1967). Danach sind die durch β-Strahlen hervorgerufenen Silberkörner größer als die Körner des „Schleiers” (background). In unseren Präparaten ergaben sich mittlere Durchmesser von 0,89 μm für Tritium-bedingte Silberkörner und von 0,64 μm für background-Körner.

• 2. Größenunterschiede des Abbildes der einzelnen Körner in Auflicht und Durchlicht. Bei unserem Material verhielten sich die Durchmesser wie 0,64 μm zu 0,60 μm. Der Unterschied kommt dadurch zustande, daß sich mit dem Wechsel der Beleuchtungsart auch die Schärfentiefe der mikroskopischen Abbildung ändert.

• 3. Die in der Fernsehkamera eingebaute Aufnahmeröhre, ein Vidikon, eignet sich für Untersuchungen an Autoradiogrammen nicht optimal. Wegen des durch die Zeilenabtastung bedingten geringen Auflösungsvermögens ist eine hohe Nachvergrößerung nötig. Dadurch muß wegen der außerdem gegebenen geringen Lichtempfindlichkeit eine sehr starke Beleuchtung verwendet werden, z.B. eine 250 W-Xenonlampe.