Untersuchungen über die Freisetzung von Serotonin aus Blutplättchen durch Thrombin

Zusammenfassung

Die durch Thrombin bewirkte Serotoninfreisetzung wurde mit Hilfe des reinen Fermentes an Suspensionen von Kaninchen-Thrombocyten studiert. Die Abhängigkeit der Reaktion vom Suspensionsmedium, der Thrombinmenge, der Einwirkungszeit und der Temperatur sowie der Einfluß von Thrombininhibitoren wurden untersucht. Gleichzeitig wurde die durch Thrombin ausgelöste VM der Blutplättchen beobachtet.

Die zur Serotoninfreisetzung führende Reaktion des Thrombins läuft mit großer Geschwindigkeit bei pH 7,0–9,0 ab und ist innerhalb weniger Sekunden beendet. Die maximale Freisetzung wird bereits bei Einwirkung von 1 NIH-E Thrombin/ml erreicht. Sie beträgt 85–90% des Gesamtserotoningehaltes der Plättchen. Die Thrombinwirkung kann durch den spezifischen Thrombininhibitor Hirudin völlig verhindert werden. Mit EDTA behandelte Plättchen geben nach Einwirkung von Thrombin den größten Teil ihres Serotonins erst auf nachträgliche Calciumzugabe ab.

Die Serotoninfreisetzung ist unabhängig vom Zerfall der Blutplättchen. In calciumfreier Lösung mit Thrombin behandelte Blutplättchen geben Serotonin ohne im Phasenkontrast-Mikroskop sichtbare morphologische Veränderungen ab und zerfallen erst bei nachträglicher Zugabe von Calciumionen.

Summary

The release of serotonin (5-HT) induced by thrombin has been investigated by means of the pure enzyme in suspensions of rabbit platelets.

The dependence of the reaction upon the kind of the incubation medium, the quantity of thrombin, the duration of incubation and the temperature, furthermore the influence of thrombin-inhibitors have been studied. In the same time the viscous metamorphosis of the platelets induced by thrombin has been noticed.

The release of serotonin by thrombin was very rapid at pH 7,0–9,0 and came to an end in a few seconds. Maximal release occurs in the presence of 1 NIH-U./ml. The amount liberated from the plateles is 85–90 p.c. of the whole serotonin content. The action of thrombin may be completly inhibited by the specific thrombin-inhibitor Hirudin.

From platelets pretreated with EDTA and incubated with thrombin most of their serotonin is liberated by further addition of calcium. The release of serotonin is independend of the viscous metamorphosis of platelets. Platelets treated with thrombin in calcium-free solutions release serotonin without morphological alterations visible under phase-contrast-microscope. Viscous metamorphosis occurs only after further addition of calcium.