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Entwicklung eines qPCR-Assays zum Nachweis der Sekretart

Identifikation von Sperma, Vaginalsekret und Speichel über zellspezifische Methylierungsmuster
  • A. SenstEmail author
  • J. Dressler
  • J. Edelmann
  • M. Kohl
Originalien
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Zusammenfassung

Neben dem Nachweis von individualspezifischen Personenprofilen ist die Spurencharakterisierung ein wichtiges Werkzeug in der forensischen Molekulargenetik, um eine Rekonstruktion des Tathergangs zu ermöglichen. Viele bisher gängige Verfahren nutzen hierfür den Nachweis spezifischer Proteine. Neben RNA-Verfahren stellt der Nachweis von zellspezifischen Methylierungsmustern eine mögliche Alternative dar. In der vorgestellten Studie wurde ein qPCR-Assay (quantitative polymerase chain reaction) nach Restriktionsverdau mit dem methylierungssensitiven Enzym HpaII erprobt. Hierfür wurde aus Sekretproben von 54 freiwilligen Probanden (n = 71) sowie verschiedenen Gewebeproben von 12 Verstorbenen (n = 91) DNA extrahiert, mit HpaII inkubiert und anschließend im Vergleich zu unbehandelten DNA-Proben quantifiziert. Aus den mit HpaII behandelten und unbehandelten DNA-Proben wurde die Differenz der CT-Werte (CT = cycle threshold) ermittelt, und hieraus wurden Rückschlüsse auf das jeweilige Sekret gezogen. Von den 3 untersuchten gewebespezifischen Markern ergaben sich für den vaginalsekretspezifischen Marker VM03 und den spermasekretspezifischen Marker SM02 jeweils für Spermasekretproben im Vergleich zu den übrigen untersuchten Körperflüssigkeiten z. T. signifikant abweichende CT-Wert-Differenzen, womit der hier vorgestellte qPCR-Assay für den Nachweis von Spermasekret geeignet erscheint. Für einen Nachweis von Speichel und Vaginalsekret sind weitere Versuche mit zusätzlichen Markern notwendig.

Schlüsselwörter

Forensische Genetik Sekretnachweis qPCR DNA-Methylierung 

Development of a qPCR assay for detection of secretion types

Identification of semen, vaginal secretion and saliva using tissue-specific methylation patterns

Abstract

In addition to the detection of individual-specific DNA profiles, knowledge of the cellular origin of a trace is important to enable the reconstruction of the crime course. For this purpose, the detection of tissue-specific proteins is usually used in the forensic examination. In addition to various RNA methods, the detection of tissue-specific methylation patterns (TSMPs) represents a possible alternative. This study presents a qPCR assay after digestion with the methylation-sensitive restriction enzyme HpaII. For the study DNA was extracted from body fluid samples from 54 volunteers (n = 71) as well as various tissue samples from 12 deceased persons (n = 91), incubated with HpaII and subsequently quantified in comparison to untreated DNA samples. The differences in CT values of the HpaII-treated and untreated samples were determined and compared between the body fluids. Among the three tissue-specific markers investigated here, differing CT values were found for the vaginal secretion-specific marker VM03 and the semen-specific marker SM02. With these two markers, the values of semen samples showed significant differences from those of the other body fluids investigated. Thus, the presented method seems to be suitable for the detection of semen. For the other body fluids further investigations with additional markers are necessary.

Keywords

Forensic genetics Tissue identification qPCR DNA methylation 

Notes

Einhaltung ethischer Richtlinien

Interessenkonflikt

A. Senst, J. Dressler, J. Edelmann und M. Kohl geben an, dass kein Interessenkonflikt besteht.

Die im vorliegenden Manuskript beschriebenen Untersuchungen am Menschen wurden mit Zustimmung der zuständigen Ethik-Kommission (AZ 077/18-ek) bzw. im Einklang nationalem Recht sowie gemäß der Deklaration von Helsinki von 1975 (in der aktuellen überarbeiteten Fassung) durchgeführt. Von allen beteiligten Personen liegt eine Einverständniserklärung vor.

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Copyright information

© Springer Medizin Verlag GmbH, ein Teil von Springer Nature 2019

Authors and Affiliations

  1. 1.Institut für RechtsmedizinUniversität LeipzigLeipzigDeutschland
  2. 2.Institut für Organismische und Molekulare Evolutionsbiologie MainzMainzDeutschland

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