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Klinische Wochenschrift

, Volume 41, Issue 12, pp 577–580 | Cite as

Verfahren zur automatischen Messung von Enzymkinetiken

  • Georg Brehmer
  • Karl Heinz Hölzer
  • Gerhard Binzus
Originalien

Zusammenfassung

Es wird ein neues Verfahren zur automatischen Untersuchung von Enzymkinetiken angegeben. Die Umsatzgeschwindigkeit einer Enzymreaktion in Abhängigkeit von jeweils einer veränderlichen Größe wird hierbei am durchlaufenden Reaktionsgemisch kontinuierlich gemessen und registriert. Unabhängige Veränderliche kann eine Konzentration (z. B. Substrat-, Coenzym-, Wasserstoffionenkonzentration) oder die Temperatur sein. Am Beispiel der Ermittlung einer Aktivitäts-pS-Kurve (Koordinaten:v=Umsatzgeschwindigkeit;pS=negativer Logarithmus der Substratkonzentration) wird das Verfahren im Einzelnen beschrieben. Unsere Methode eignet sich bisher zur Untersuchung von Enzymen, deren Umsatz durch Messung der Lichtabsorption erfaßbar ist. Als Beispiel werden Aktivitäts-pS-Kurven von Lactatdehydrogenase aus menschlichem Herzmuskel- und Leberhomogenisat sowie von Kaninchenmuskel-LDH gezeigt und die ermittelten Michaeliskonstanten angegeben.

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Literatur

  1. 1.
    Wieland, Th., u.G. Pfleiderer: Nachweis der Heterogenität von Milchsäure-dehydrogenase verschiedenen Ursprungs durch Trägerelektrophorese. Biochem. Z.329, 112 (1957).Google Scholar
  2. 2.
    Hess, B.: DPN-dependent enzymes in serum. Ann. N.Y. Acad. Sci.75, 292 (1958).Google Scholar
  3. 3.
    Sayre, F. W., andB. R. Hill: Fractionation of serum lactic dehydrogenase by salt concentration gradient elution and paper electrophoresis. Proc. Soc. exp. Biol. (N.Y.)96, 695 (1957).Google Scholar
  4. 4.
    Hill, B. R.: Further studies of the fractionation of lactic dehydrogenase of blood. Ann. N.Y. Acad. Sci.75, 304 (1958).Google Scholar
  5. 5.
    Thiers, R. E., andB. L. Vallee: Analytical considerations in serum enzyme determinations. Ann. N.Y. Acad. Sci.75, 214 (1958).Google Scholar
  6. 6.
    Vesell, E. S., andA. G. Bearn: The heterogeneity of lactic and malic dehydrogenase. Ann. N.Y. Acad. Sci.75, 286 (1958).Google Scholar
  7. 7.
    Wieland, Th., G. Pfleiderer, I. Haupt u.W. Wörner: Über die Verschiedenheit der Milchsäuredehydrogenasen. Biochem. Z.332, 1 (1959).Google Scholar
  8. 8.
    Hess, B., u.S. I. Walter: Über das Protein der Laktatdehydrogenase im menschlichen Serum und Geweben. Klin. Wschr.38, 1080 (1960).Google Scholar
  9. 9.
    Schmidt, E., u.F. W. Schmidt: Über die Änderung der Substrat-Affinität der Malat-dehydrogenasen im Serum. Klin. Wschr.38, 810 (1960).Google Scholar
  10. 10.
    Wroblewski, F., C. Ross andF. Gregory: New Engl. J. Med.263, 531 (1960).Google Scholar
  11. 11.
    Amelung, D.: Serum-Ferment-Bestimmungen bei perniziöser Anämie. Dtsch. med. Wschr.85, 1629 (1960).Google Scholar
  12. 12.
    Hess, B., u.S. I. Walter: Absorptions-Methode zur Differenzierung der Laktatdehydrogenase sowie anderer löslicher Fermente und Proteine in Serum und Geweben. Klin. Wschr.39, 213 (1961).Google Scholar
  13. 13.
    Pfleiderer, G., u.E. D. Wachsmuth: Alters- und funktionsabhängige Differenzierung der Lactatdehydrogenase menschlicher Organe. Biochem. Z.334, 185 (1961).Google Scholar
  14. 14.
    Pfleiderer, G., u.D. Jeckel: Individuelle Milchsäuredehydrogenasen bei verschiedenen Säugetieren. Biochem. Z.329, 370 (1957).Google Scholar
  15. 15.
    Plagemann, P. G. W., K. F. Gregory andF. Wroblewski: The electrophoretically distinct forms of mammalian lactic dehydrogenase. I. Distribution of lactic dehydrogenases in rabbit and human tissues. J. biol. Chem.235, 2282 (1960).Google Scholar
  16. 16.
    Plagemann, P. G. W., K. F. Gregory andF. Wroblewski: The electrophoretically distinct forms of mammalian lactic dehydrogenase. II. Properties and interrelationships of rabbit and human lactic dehydrogenase isozymes. J. biol. Chem.235, 2288 (1960).Google Scholar
  17. 17.
    Plagemann, P. G. W., K. F. Gregory u.F. Wroblewski: Die elektrophoretisch trennbaren Lactat-dehydrogenasen des Säugetieres. III. Einfluß der Temperatur auf die Lactat-dehydrogenasen des Kaninchens. Biochem. Z.334, 37 (1961).Google Scholar
  18. 18.
    Bücher, Th., u.P. Baum: Über Plasmaspiegel und Stoffwechselfermente. Vortr. Dtsch. Kongr. f. ärztl. Fortbildung. Berlin 1958.Google Scholar
  19. 19.
    Bergmeyer, H. U., B. Hess u.E. Bernt: In:H. U. Bergmeyer, Methoden der enzymatischen Analyse. Weinheim 1962.Google Scholar
  20. 20.
    Kubowitz, F., u.P. Ott: Isolierung und Kristallisation eines Gärungsfermentes aus Tumoren. Biochem. Z.314, 94 (1943).Google Scholar
  21. 21.
    Warburg, O., u.W. Christian: Gärungsfermente im Blutserum von Tumor-Ratten. Biochem. Z.314, 399 (1943).Google Scholar
  22. 22.
    Meister, A.: Reduction ofα, γ diketo andα keto acids catalysed by muscle preparations and by cristalline lactic dehydrogenase. J. biol. Chem.184, 117 (1950).Google Scholar
  23. 23.
    Wieland, Th., G. Pfleiderer u.F. Ortanderl: Über die Verschiedenheit der Milchsäuredehydrogenasen. III. Vergleiche der Milchsäuredehydrogenasen aus verschiedenen Rattenorganen. Biochem. Z.331, 103 (1959).Google Scholar
  24. 24.
    Kaplan, N. O., Mm. Ciotti, M. Hamolsky andR. E. Bieber: Molecular heterogeneity and evolution of enzymes. Science131, 392 (1960).Google Scholar
  25. 25.
    Dillmann, A.: Internationale Nomenklaturvorschläge in der Enzymologie. Dtsch. med. Wschr.87, 1065 (1962).Google Scholar
  26. 26.
    Schwert, G. W., andM. T. Hakala: Lactic dehydrogenase. I. Kinetics. Arch. Biochem.38, 55 (1952).Google Scholar
  27. 27.
    Hakala, M. T., A. J. Glaid andG. W. Schwert: Lactic dehydrogenase. II. Variation of kinetic and equilibrium constants with temperature. J. biol. Chem.221, 191 (1956).Google Scholar
  28. 28.
    Takenaka, Y., andG. W. Schwert: Lactic dehydrogenase. III. Mechanism of the reaction. J. biol. Chem.223, 157 (1956).Google Scholar
  29. 29.
    Winer, A. D., andG. W. Schwert: Lactic dehydrogenase. IV. The influence of pH on the kinetics of the reaction. J. biol. Chem.231, 1065 (1958).Google Scholar
  30. 30.
    Schwert, G. W.: The mode of action of heart muscle lactic dehydrogenase. Ann. N.Y. Acad. Sci.75, 311 (1958).Google Scholar
  31. 31.
    Eadie, G. S.: The determination of enzyme dissociation constants. J. biol. Chem.146, 85 (1942).Google Scholar
  32. 32.
    Netter, H.: Theoretische Biochemie. Berlin-Göttingen-Heidelberg 1959.Google Scholar
  33. 33.
    Ohlenbusch, H. D.: Persönliche Mitteilung.Google Scholar

Copyright information

© Springer-Verlag 1963

Authors and Affiliations

  • Georg Brehmer
    • 1
  • Karl Heinz Hölzer
    • 1
  • Gerhard Binzus
    • 1
  1. 1.Aus der I. Medizinischen Universitätsklinik Hamburg-EppendorfGermany

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