Archives of Dermatological Research

, Volume 253, Issue 3, pp 301–310 | Cite as

Isolation of single cell nuclei from human epidermis for cytophotometric DNA — measurements

  • Dieter Haag
  • Cyrus Tschahargane
  • Volker Ehemann
Article
Received:

Summary

Diluted acetic acid was applied to dissociate human epidermis into its constituents. A simple procedure to gain isolated single cells for cytophometric determination of their nuclear DNA content is described. The method is suited for single cell cytophotometric measurements and for cytofluorimetric flow systems likewise. The losses of Feulgen—stainable nuclear DNA during preparation were studied in dependence on the incubation time of the cells in acetic acid. The kinetics of extraction of nuclear DNA by diluted acetic acid follow a reaction of the first order. It was possible therefore to formulate a simple mathematical correction for the losses during the isolation of epidermal cells. Avoiding the disadvantage of cut nuclei in histological sections the method is used to study the DNA histograms of resting, regenerating and pathologically altered human epidermis.

Keywords

Acetic Acid Single Cell Epidermal Cell Flow System Histological Section 
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Zusammenfassung

Zur Auflösung menschlicher Epidermis in ihre zellulären Bestandteile erwies sich verdünnte Essigsäure als geeignet. Es wird eine einfache Prozedur zur Gewinnung von Einzelzellen für cytophotometrische Messungen des DNS-Gehaltes in den Zellkernen beschrieben. Diese Methode eignet sich gleichermaßen zur Herstellung von Zellsuspensionen für die Durchflußcytophotometrie wie auch von Ausstrichen auf Objektträger für die Einzelzell-Cytophotometrie. Die Verluste Feulgen-färbbarer Substanz während der Präparation wurden quantitativ erfaßt. Die Extraktion von DNS aus den Zellkernen durch verdünnte Essigsäure folgt näherungsweise einer Kinetik erster Ordnung. Demzufolge kann eine einfache Korrekturformel für die DNS-Verluste während der Präparation aufgestellt werden. Die Methode dient zur Untersuchung der DNS-Histogramme in der normal regenerierenden sowie der pathologisch veränderten menschlichen Epidermis, wobei die Nachteile angeschnittener Zellkerne in histologischen Schnitten weitgehend umgangen werden.

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Copyright information

© Springer-Verlag 1975

Authors and Affiliations

  • Dieter Haag
    • 1
    • 2
  • Cyrus Tschahargane
    • 1
    • 2
  • Volker Ehemann
    • 1
    • 2
  1. 1.Pathologisches Institut der UniversitätHeidelbergFRG
  2. 2.Institut für Vergleichende und Experimentelle PathologieHeidelbergFRG

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