Untersuchungen zur Gewebsfärbung mit basischen Farbstoffen
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Zusammenfassung
Die in der Histologie übliche Fixierung mit 10%igem Formalin führt nur zu einer teilweisen, nicht aber zu einer völligen Blockierung der basischen Gruppen des Lysins. In 1%igem Formalin wird durch reversible Blockierungsreaktionen die basische Ladung des Eiweißes weiter verringert. Eine völlige Ausschaltung läßt sich aber nicht erreichen. Insbesondere wird das Arginin nicht blockiert. Höhere Formalinkonzentrationen erschweren — wohl infolge ihrer hohen Osmolarität — die Farbstoffbindung am Eiweiß, so daß sie zu einer völligen Blockierung der basischen Gegenladung in der Histochemie nicht verwendet werden können. Jedoch erfolgt bereits in 1% Formalin enthaltender Färbelösung bei pH 9 eine Methylenblaubindung an nahezu alle sauren Eiweißgruppen, so daß auf diese Weise eine angenäherte Bestimmung der sauren Gesamtladung möglich ist. Wie andere Untersuchungen ergaben, kann diese Bestimmung aber einfacher und sicherer durch vorherige Desaminierung und Chlorinierung der Schnittpräparate erreicht werden.
Studies about tissue-staining by basic dyes
Summary
The influence of formalin fixation and of the reversible protein-reactions of formalin on the staining of protein by basic dyes was studied by dye-adsorption on powdered protein, by column- and thin layer chromatography and by histophotometry. The fixation of specimen by 10% formalin usually used in histology only results in a partial block but not in a complete block of basic groups of lysine. In a 1% formalin solution the basic charge of protein will be reduced by reversible blocking reactions, but there is no complete elimination. Especially arginine cannot be blocked. Higher formalin concentrations diminish the amount of protein-bound dye due to their high osmolarity as a result of which they cannot be used histochemically to block basic opposite charges completely. But in dye-solutions with 1% formalin and a pH 9 methylene blue will be bound to almost all of the acid protein groups. Therefore this method may be used for rough evaluation of the total acid charge. But other own investigations show that it is easier and more accurate to evaluate the acid total charge by a preceeding desamination and chlorination of the specimen.
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