Appropriatezza della ricerca di cloni EPN nel sangue periferico

Riassunto

Premesse.

L’emoglobinuria parossistica notturna (EPN) è un disordine ematologico raro caratterizzato da anemia emolitica, trombosi e difetti dell’ematopoiesi. Tale patologia è dovuta a una mutazione somatica del gene PIG-A che comporta la mancata produzione del glicosil-fosfatidil-inositolo (GPI), a cui si ancorano proteine di membrana quali CD55 e CD59 che inibiscono l’attivazione del complemento su diversi tipi cellulari. Dal 2010 il nostro Laboratorio partecipa alla compilazione dell’archivio CLONEPnh. Integrando i dati in esso inseriti con quelli contenuti nell’archivio del nostro Laboratorio è stato valutato il cambiamento negli anni del numero di richieste di ricerca del clone EPN e, in relazione a esso, come è variato il numero dei nuovi cloni individuati.

Metodi.

È stata effettuata un’analisi citofluorimetrica a sei colori su sangue periferico, di pazienti afferenti alla Divisione Universitaria di Ematologia dell’Azienda Ospedaliera Città della Salute e della Scienza di Torino, utilizzando il FLAER (tossina batterica inattivata) e i seguenti anticorpi: CD45, CD14, CD33, CD66, CD55, CD59, CD235a. I campioni sono stati acquisiti con citofluorimetro FACSCantoII e analizzati con il software FACS Diva. I dati sono stati inseriti nell’archivio CLONEPnh (www.CLONEPnh.com).

Risultati.

Dai dati inseriti nell’archivio CLONEPnh si evince che le richieste di ricerca di EPN sono state 13 nel 2010, 16 nel 2011, 28 nel 2012 e 12 nei primi sei mesi del 2013 e i cloni individuati sono stati, rispettivamente, 1, 0, 1 e 1. Un andamento simile, anche se con un numero decisamente minore di analisi richieste, è stato riscontrato anche negli anni precedenti (dal 2000) analizzando l’archivio del nostro Laboratorio.

Conclusioni.

I nostri dati mostrano un aumento negli anni di analisi effettuate, a cui, però, non è corrisposto un aumento dei cloni individuati.

L’aumento delle richieste si può giustificare considerando che la diagnosi di EPN è diventata prevalentemente citofluorimetrica e che le recenti linee guida consigliano, in pazienti con displasie midollari, di ricercare e monitorare cloni di modesta entità mediante la metodica ad alta sensibilità.

Tuttavia, per ridurre il costo in termini di tempo e risorse, sarebbero auspicabili l’elaborazione e la validazione di protocolli citofluorimetrici più rapidi con l’utilizzo di un pannello ridotto di reagenti.

Summary

Background.

Paroxysmal nocturnal haemoglobinuria (PNH) is a rare haematological disease characterized by haemolytic anaemia, thrombosis and bone marrow failure. This malignancy arises by somatic mutations of PIG-A gene resulting in a partial or absolute deficiency of cell membrane proteins linked to glycosylphosphatidylinositol (GPI), as CD55 and CD59, involved in the control of complement activation. Since 2010 our laboratory has been participating to the update of the CLONEPnh archive. The data of internal and CLONEPnh archives were merged in order to compare the number of patients positive for PNH clone to the number of samples analyzed.

Methods.

All peripheral blood samples, of patients admitted to the University Division of Haematology of Azienda Ospedaliera Città della Salute e della Scienza di Torino, were stained using FLAER (inactivated bacterial toxin) and a combinations of six monoclonal antibodies: CD45, CD14, CD33, CD66, CD55, CD59, CD235a. The samples were acquired on FACSCanto II flow cytometer and analyzed with FACS Diva software. The data were reported in CLONEPnh archive (www.CLONEPnh.com).

Results.

The data of CLONEPnh archive show that the analysis carried out were: 13 in 2010, 16 in 2011, 28 in 2012 and 12 in first six months of 2013 and new PNH clones detected were 1, 0, 1 and 1 respectively. The data of our internal archive show a similar trend, with fewer analysis performed, also in previous years (since 2000).

Conclusions.

Our data show a stable number of PNH clones detected despite an increased number of analysis performed. The essential role of flow cytometry in diagnosis of PNH and the guidelines indication, about search and monitoring of small PNH clones with high sensitivity flow cytometry method, could explain this trend.

However, for a better use of economical resources, faster and less expensive flow cytometric protocols must be developed and validated.