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Das Hydrolyseverhalten des Chromatins von Zellkernen aus frühembryonalenTriturus-Geweben

Hydrolysis behaviour of chromatin of nuclei from early embryonic tissues ofTriturus. Studies on the proportionality of feulgen values and DNA content

Zur Frage der Proportionalität von Feulgen-Werten und DNS-Mengen

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Wilhelm Roux's archives of developmental biology Aims and scope Submit manuscript

Summary

Feulgen hydrolysis curves were plotted for isolated nuclei from various regions (ecto-, meso- and endoderm) and developmental stages [mid to late gastrula (Harrison-St. 12b) and tailbud stage (Harr. St. 25, 35)] ofTriturus vulgaris embryos. Hydrolysis was carried out for 10 to 70 min with 5N HCl at 20° C. Single-peaked hydrolysis curves with a maximum between 30 and 40 min were obtained in all cases. The ascending limbs of all the hydrolysis curves are similar in shape up to the maximum. Differences in DNA content of nuclei from different embryonic regions become visible not only at the optimum time but also after short hydrolysis times (10 min). After reaching the maximum there are significant differences in the descending parts of the curves. In the endoderm and mesoderm a drastic loss of apurinic acid occurs after 40 and 50 min of hydrolysis, respectively, whereas in the nuclei of the mesencephalon and the neurectoderm no measurable extraction of depolymerized DNA can be detected after 60 min. These differences in chromatin stability make lead to a levelling out of the Feulgen values over longer hydrolysis periods, so that differences in the DNA content of nuclei from different parts of the embryo can no longer be detected after 60 min. Nuclear volume and histone content have no influence on the results obtained from the Feulgen reaction when optimum hydrolysis times are used.

Zusammenfassung

Von Zellkernen aus verschiedenen Keimbereichen (Ekto-, Meso-, Entoderm) und Entwicklungsstadien [mittlere bis späte Gastrula (Harrison-Stad. 12b) und Schwanzknospe (Harr.-Stad. 25, 35)] vonTriturus vulgaris wurden Feulgen-Hydrolysekurven bestimmt. Hydrolysiert wurde 10 bis 70 min in 5n HCl bei 20° C. In allen Fällen wurdentypisch eingipflige Hydrolysekurven mit einem Optimum zwischen 30 und 40 min gefunden. Im Verlauf des aufsteigenden Kurventeils bis zum Optimum stimmen die einzelnen Kurven gut überein. Unterschiede im DNS-Gehalt der Keimbereiche werden nicht erst im Hydrolyse-Optimum, sondern bereits nach 10 min (Unterhydrolyse) nachweisbar. Nach Erreichen des Optimums werden dann zwischen den Bereichen signifikante Unterschiede im Hydrolyseverlauf sichtbar. Während in den Mesencephalon- (Stad. 35) und Neuroektodermkernen (Stad. 12b) nach 60 min Hydrolyse praktisch noch keine Extraktion depolymerisierter DNS festzustellen ist, setzt im Entoderm ein beträchtlicher Verlust an DNS bereits nach 40 und im Mesoderm nach 50 min ein. Diese Unterschiede im Hydrolyseverhalten des Chromatins führen zu einer völligen Nivellierung der Feulgen-Werte bei längeren Hydrolysezeiten, so daß nach 60 min zwischen den Keimbereichen keine Unterschiede im DNS-Gehalt mehr nachgewiesen werden können. Kerngröße und Histon-Gehalt haben keinen Einfluß auf das Resultat der Feulgen-Reaktion im Hydrolyseoptimum.

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Authors and Affiliations

  1. Lehrstuhl für Experimentelle Morphologie, Zoologisches Institut der Universität Köln, Weyertal 119, D-5000, Köln 41, Bundesrepublik Deutschland

    Klaus Lohmann

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  1. Klaus Lohmann
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Lohmann, K. Das Hydrolyseverhalten des Chromatins von Zellkernen aus frühembryonalenTriturus-Geweben. Wilhelm Roux' Archiv 177, 285–299 (1975). https://doi.org/10.1007/BF00848180

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